内容提要 目的：研究地黄寡糖在小鼠及大鼠体内的吸收和吸收部位。方法：用高效液相色谱／柱后荧光衍生化法测定小鼠口服和静脉注射水苏糖后的血药浓度；大鼠原位肠灌流模型研究水苏糖的吸收和吸收部位；肠抑菌实验观察水苏糖在肠产内的代谢。结果：口服吸收快但少，生物利用度为3.82％。在胃、十二指肠、空肠和回肠的吸收率分别为6.03%、13.80％、8.33％和0.53％，在大肠内不吸收。正常组及卡那霉素抑菌组的小鼠灌服水苏糖3h后，两组肠内的水苏糖残存量分别为8.6％和93.4％。结论：水苏糖口服吸收少，主要吸收部位在小肠上部，未吸收的水苏糖在肠内被细菌破坏。
关键词：地黄寡糖 水苏糖 吸收 肠内细菌
地黄寡糖由本所植化室从生地黄中提取，其中含有效成分为四糖60％，三糖20％，其余20％为双糖或单糖。药理实验证明，该混合物具有增强机体造血功能和调节免疫功能等活性，其中主要有效成分为四聚糖水苏糖。曾有文献认为，水苏糖等一些寡糖在胃肠道不吸收而经肠道细菌代谢为CO2、H2、短链脂肪酸等，因此，无人研究其活性。我所在研究地黄多糖的基础上，分离得到了地黄寡糖并证实了其良好的生物活性。但是地黄寡糖在胃肠道中是否吸收，如何吸收均属未知。本研究通过考察其吸收动力学的特点，为开发应用该活性成分提供依据。经药理实验证明水苏糖与地黄寡糖的生物活性无明显差异。因此，本实验以水苏糖为研究对象。
材料与方法
1、动物 昆明雄性小鼠，体重18－22g；Wistar雄性大鼠，体重300～340g均由本院动物中心提供。
2、药品与试剂 水苏糖为Sigma公司产品，高碘酸钠为普通化学试剂，牛磺酸为生化试剂。
3、主要仪器 P1000色谱泵（美国光谱物理），LC－5A色谱泵，RF－530荧光检测器，C－R3A积分仪（日本岛津），DDB－300多通道电子蠕动泵，WC／09－05恒温水浴，95％O2－5％CO2混合气（北京氦普北分气体工业有限公司）。
4、实验方法
4.1大鼠原位肠灌流 参照文献的方法，大鼠用1％戊巴比妥钠(0.5/100g,ip)麻醉，仰卧位固定，腹部作U形切口暴露腹部器官。先结扎幽门静脉、腹腔动脉、肝动脉和左肾动脉，用0.5mm×1mm的塑料管从右肾动脉插管，管尖穿过腹主动脉进入上肠系膜动脉5mm，作为灌流液入口（灌流液组成为：Krebs-Ringer NaHCO3缓冲液，含0.3％牛血清白蛋白，0.5％右旋糖酐T－40，PH7.4），固定后立即开通灌流，流速3.0ml/min。在门静脉上离肝脏约1.2cm处作一切口，用1.2mm×2mm的塑料管面向小肠插管并固定，切开隔膜，让流出物导管与门静脉形成一条直线，下腔静脉在肝和心脏间结扎，并将流速提高到8.0ml/min.用加热灯泡维持标本温度在（36±2）0C。胃下方十二批肠和盲肠处分别用线结扎。用灌流液50ml对标本循环15min后，将水苏糖10mg注入十二指肠，分别于0、5、10、15、20、60、90、120min测定灌流液中的水苏糖浓度。
4.2吸收动力学 小鼠灌胃前12h禁食，自由饮水。按2g/kg灌胃后于0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0h采血，离心（3000r／min，10min）分离的血浆样品供测定用。用于静脉注射小鼠自由进食和饮水。按200mg/kg尾静脉注射后于0、5、10、15、30、60、120、240min采血，分离血浆供测定用。
4.3吸收部位实验 大鼠用1％戊巴比妥钠（0.5/100g，ip）麻醉，仰卧位固定，腹部切口，分别暴露胃、十二指肠、空肠、回肠和直肠。用370C的生理盐水（PH2用于胃、PH6.5用于十二指肠和空肠、PH7.4用于回肠和直肠）清洗内容物后在所需部位的两端插管，并用止血钳夹紧。将水苏糖（50mg/kg）注入胃或不同部位的肠腔内后，1h后用生理盐水冲洗各部位，测定其在各部位的残留量，推算吸收率。
4.4肠细菌代谢实验 小鼠随机分为正常组和卡那霉素处理组，每组3只。卡那霉素处理组为连续3天灌服卡那霉素1g/kg，每日两次。第4天两组分别灌服水苏糖（50mg/kg），3h后取全肠，匀浆后测定水苏糖的含量。
4.5样品测定 参照文献方法，取血浆100ul于离心管中，加1mol/L高氯酸60ul，离心（10000r/min，2min）后取上清液，加入1mol/L NaOH 40ul，100ul用于色谱分析，其他样品可过滤后直接进样。
4.6药代动力学参数的处理 血药浓度数据采用统计矩的方法处理得到如下参数：达峰时间（Tmax），达峰浓度（Cmax），生物半衰期（t1/2），平均滞留时间（MRT），曲线下面积（AUC），总清除率（CLtol），表观分布容积（Vd）和吸收率（F）。AUC根据梯形法计算。
结 果
1、水苏糖的吸收情况 见图1。水苏糖在给药后1h内以一定的速度吸收，以后呈缓慢吸收趋势，2h时吸收已达平衡，吸收率约为10％。
2、小鼠静脉注射和灌胃后的血药浓度随时间变化情况 见图2，动力学参数见表1。静脉注射后，水苏糖糖的动力学呈现出与一般药物相似的特点，即含快速和慢速两个消除相。口服灌胃后，水苏糖吸收较快，15min在血中即可测到其浓度，但吸收不规则。由AUC求得的吸收率为3.75％。水苏糖在体内消除较快，半衰期约为40min。
3、水苏糖在胃肠道的吸收情况 见图3。水苏糖在胃、十二指肠、空肠和回肠的吸收率分别为6.03％、13.80％、8.33％和0.53％，在大肠内不吸收。
4、肠道菌对水苏糖吸收与代谢的影响 分别给正常组及卡那霉素处理组的小鼠灌服水苏糖的实验结果表明,给药3h后,正常组肠内的水苏糖残存量为8.6%,而卡那霉素处理组肠内的水苏糖残存量却高达93.4%,见图4,提示水苏糖在肠内可大量被细菌代谢.
表1 水苏糖在小鼠体内的动力学参数
Cmax Tmax t1/2 MRT AUC0 Vd CLmt F
(mg/l) (h) [mg/(l·h)]] (L/kg) [L/(h·kg)] (%)
口服
39.9 2.0 0.57 1.78 9.00 0.02 0.01 3.82
(2g/kg )
静脉注射
_ _ 0.62 0.62 240 0.52 0.82 _
(200mg/kg)
注：*换算成同等剂量的AUC
讨 论
原位大鼠肠灌流及整体动物实验证明，水苏糖可经胃肠道吸收，但吸收少。这如何与其良好的生物活性相联系呢？从目前的结果可以作如下推测：是否在肠道局部刺激淋巴组织而发挥其免疫作用？已有研究表明，局部刺激淋巴组织能增加淋巴细胞的移动，促进GM－CSF和IL－1样活性物质的分泌。水苏糖在连续给药时可能通过不断刺激淋巴组织而产生免疫效果。以上推测有待药理实验证明。
肠道细菌对糖的吸收有一定影响，这在Ahr等对阿卡波糖的研究中已得到证实。本实验也间接证明抑菌可提高水苏糖的吸收。Ahr等的研究还表明，连续给药可减少肠道细菌而增加阿卡波糖的吸收。因此可以推测，在连续给药进行水苏糖的药理活性研究时，其吸收会略有增加。
本研究中还发现水苏糖在胃肠道中可能会降解为三聚糖而被吸收，有关这方面的研究工作正在进行。
